L'absorbance et la fluorescence apparaissent souvent comme concurrentes pour la quantification des biomolécules.
Les débats vont bon train puisque chacune présente leurs propres avantages et inconvénients et le choix entre ces deux techniques est souvent source de difficultés. Pourtant, les deux types de tests fonctionnent de la même manière pour le dépistage des nouveau-nés. D’ailleurs, l’absorbance, souvent délaissée, présente en réalité des avantages non négligeables et s’avère tout aussi efficace que la fluorescence.
Même si un test colorimétrique est généralement moins sensible et spécifique qu'un test fluorométrique, le dépistage néonatal par absorbance a pourtant bel et bien prouvé son efficacité. Focus sur cette technique totalement appropriée pour le dépistage des nouveau-nés.
L’absorbance est une technique suffisamment sensible
La concentration de biomarqueurs dans le dépistage des nouveau-nés s'élève à quelques microgrammes par litre, soit une concentration allant du milli- au micro-molaire. Les tests par absorbance – enzymatiques ou ELISA – permettent de détecter des molécules jusqu'au niveau nano-/pico-molaire [1]. Bien que moins sensible que la fluorescence, le dépistage néonatal par absorbance reste suffisamment sensible.
Une technologie simple et abordable
Le prix des spectrophotomètres tend à être inférieur à celui des fluorimètres [2]. De même, les substrats chromogènes sont plus économiques. Le dépistage néonatal par absorbance apparait plus rentable. Ceci est particulièrement important dans un marché où le coût par détermination domine.
De plus, les spectrophotomètres sont des instruments faciles à utiliser [2] :
- Les logiciels les rendent intuitifs
- La maintenance est aisée grâce au peu de pièces mobiles
Dépistage néonatal par absorbance : une spécificité renforcée
Comme pour la fluorescence, des substrats chromogènes particuliers sont utilisés pour quantifier les biomarqueurs du dépistage néonatal : des sels de tétrazolium pour les tests enzymatiques et du TMB pour les tests ELISA [3]. Le traitement enzymatique de ces sels conduit à la génération d'une coloration. La lecture du signal d'absorbance est alors spécifique et proportionnelle à l'analyte d'intérêt.
Influence réduite des conditions expérimentales
Les conditions expérimentales (par exemple le pH, la température, la turbidité) influencent à la fois les tests d'absorbance et de fluorescence. Les fabricants prennent donc toutes les précautions nécessaires pour fournir des kits de première qualité : réactifs standardisés, protocole précis et contrôle de la qualité des produits. Tout cela permet d'éviter les erreurs de mesure dans le dépistage néonatal par absorbance ou par fluorescence.
Concrètement, pourquoi choisir l’absorbance ?
ZenTech s.a. propose une large gamme de kits enzymatiques ou ELISA pour le dépistage des nouveau-nés. Ils sont actuellement tous basés sur la mesure de l'absorbance. Le choix de l'absorbance est intéressant car :
- La sensibilité et la spécificité sont suffisantes pour le dépistage des nouveau-nés
- La technique est simple et abordable
- Il n'y a aucune restriction expérimentale particulière
Pour toutes ces raisons, le dépistage néonatal par absorbance se révèle parfaitement adapté.
Sources:
- [1] Acharya, A. P. et al. (2013) ‘A fluorescent peroxidase probe increases the sensitivity of commercial ELISAs by two order of magnitude’, Chem Commun (Camb), 14, 49(88), pp. 10379–81.
- [2] https://www.biocompare.com/Bench-Tips/173963-Choosing-the-Best-Detection-Method-Absorbance-vs-Fluorescence/
- [3] Publication Fluo
